С другой стороны, перекись водорода не следует добавлять в горячую среду, если только вы не собираетесь скомпенсировать потерю перекиси при разложении, добавляя большее его количество. В связи с тем, что перекись приобретает свойства отбеливателя при температуре выше 60 °C, она будет легко разлагаться при контакте с комплексными органическими материалами при температурах от 60 °C и выше. Таким образом, перед добавлением перекись вам придется подождать, пока среда остынет — если не до комнатной температуры, то хотя бы до такой, которую терпит рука.
В противовес своему поведению в чистом растворе или стерилизованной среде, перекись быстро разлагается в присутствии перекисеразрушающих ферментов, как это случается при промывании раствором перекиси ран. Разрушенные клетки кожи и кровеносных сосудов, находящиеся в ране, в изобилии содержат перекисеразрушающие ферменты, что вызывает быстрый распад перекисного раствора и выделение пузырьков кислорода. Похожие ферменты, называемые каталаза и пероксидаза, найдены во всех разновидностях живых или бывших живыми тканях, если только они не подвергались температурному воздействию или глубокой переработке. Таким образом, необработанное зерно, мука, опилки, дерево и т. д. будут разлагать перекись за короткое время. Это означает, что вам придется избегать контакта раствора перекиси с подобными материалами при хранении. Это также означает, что если вы хотите включить указанные материалы в состав питательной среды, вам придется удостовериться в том, что перед добавлением перекиси все компоненты среды были подвергнуты тщательной тепловой обработке с целью уничтожения перекисеразрушающих ферментов.
Я предпринимаю определенные меры для обеспечения чистоты раствора перекиси при его хранении. Перед забором перекиси я, в первую очередь, протираю пробку и верхнюю часть бутылки спиртовым раствором, чтобы удалить частицы, которые могут содержать живые микроорганизмы.
После этого я либо отливаю перекись в пастеризованный мерный цилиндр, либо отбираю раствор с помощью чистой, пастеризованной пипетки, снабженной на верхнем конце ватным тампоном-фильтром. Пипетки не нуждаются в автоклавировании, но их требуется, как минимум, обрабатывать в течение нескольких минут кипятком (заполняя выше верхней градуировочной отметки, но ниже ватного тампона), а затем остужать перед тем, как производить забор перекиси.
Градуированный цилиндр объемом 100 мл может послужить удобным сосудом для погружения 10 мл пипетки в кипяток. Нагревание убьет все живые организмы, а перекись уничтожит оставшиеся термоустойчивые споры. Я также слежу за тем, чтобы не допускать закручивания пробки на бутылке, если пробка контактировала с источником заражения.
Различия в концентрации перекиси, поступающей от производителей
Суровая правда жизни состоит в том, что 3 % (согласно этикетке на бутылочке) раствор перекиси водорода, приобретенный вами в аптеке или магазине, на самом деле может иметь несколько иную концентрацию. Концентрация может заметно отличаться как в сторону больших, так и в сторону меньших значений. В какой-то степени можно избежать недоразумений, если не покупать просроченную перекись, проверяя срок истечения ее годности на этикетке (если он указан) и покупая заведомо свежий раствор (например, на бутылках, которые покупаю я, указан только месяц истечения срока годности, а год — не указан). Тем не менее, даже указанный срок годности не дает абсолютной уверенности в том, что концентрация действительно составляет 3 %. Поэтому важно уметь измерять концентрацию перекиси в растворе. Простой способ такого измерения основан на разложении перекиси из пробного образца раствора и измерении количества высвобожденного кислорода, которое я осуществляю с помощью надувного шарика.
Вот мой способ измерения примерной концентрации перекиси:
Возьмите чистую пробирку (предпочтительно с отвернутым краем на горлышке или с накручивающимся колпачком), небольшой надувной шарик и ломтик гриба такого размера, который может быть легко помещен в пробирку. Ломтик можно вырезать из ножки гриба, а кожицу нужно снять, чтобы обнажить большое количество разрушенных клеток. Самые лучшие результаты получаются с молодыми, быстро растущими грибами. Если под рукой не окажется грибов, можно использовать кусочек банана или другого фрукта, покрытого кожурой. Понадобятся также раствор перекиси, резиновое колечко, пастеризованная измерительная пипетка, мерный цилиндр на 100 мл и кастрюлька с водой.