1. С помощью пастеризованной пипетки отберите 5 мл раствора перекиси из бутылки и перенесите его в пробирку.
2. Поместите ломтик гриба на верхнюю часть пробирки (пока не допускайте попадания ломтика в перекись).
3. Освободите шарик от воздуха и натяните его на горлышко пробирки (пробирку держите наклоненной, чтобы ломтик гриба не соскользнул в раствор, пока шарик не поставлен на место).
4. Зафиксируйте резиновым колечком шарик на горлышке пробирки, чтобы газ не начал выходить наружу по мере повышения давления (я считаю наиболее эффективным использовать резинку от порванного колечка, которой можно плотно обвязать шарик на горлышке пробирки).
5. После того, как шарик сел на место, стряхните ломтик в раствор перекиси. Раствор должен немедленно вспениться из-за выделения пузырьков кислорода.
6. Взбалтывайте пробирку. Раствор перекиси должен по большей части разложиться в течение пяти или десяти минут, в зависимости о количества каталазы/пероксидазы в грибном ломтике.
7. Когда разложение почти закончится, вы увидите, что выделение пузырьков замедлилось, а сами пузырьки стали довольно мелкими. Шарик, тем временем, должен подняться и стать упругим, т. к. он наполнится высвобожденным кислородом.
Со времен занятий по химии в колледже я помню, что 5 мл 3 % раствора перекиси водорода должны произвести примерно 4 9 мл кислорода, если перекись полностью разлагается при комнатной температуре и атмосферном давлении. Измерить количество кислорода, выделенного при разложении перекиси, можно в следующем порядке:
1. Наполните градуированный мерный цилиндр водой и поставьте его вверх ногами в кастрюлю с водой, удостоверившись, что в цилиндре нет пузырьков воздуха.
2. Перекрутите шарик у горлышка пробирки, чтобы кислород не выходил наружу, снимите шарик с пробирки, крепко удерживая скрученную часть, и поместите шарик под воду в кастрюле.
3. Аккуратно выпускайте газ из шарика в перевернутый мерный цилиндр так, чтобы газ замещал находящуюся в цилиндре воду.
4. Удерживая открытый конец мерного цилиндра под водой, определите по нанесенной на цилиндр шкале значение объема кислорода.
Когда я проделал такое измерение в первый раз, у меня получилось 52 мл газа внутри градуированного цилиндра от разложения 5 мл раствора перекиси. Учитывая, что в сдутом шарике перед началом измерения могло оставаться до 3 мл воздуха, раствор перекиси произвел количество кислорода, весьма близкое к теоретическому значению для 5 мл 3 % раствора.
Теперь рассмотрим, как вычисляется нужное количество раствора перекиси, если тест дает значения концентрации выше или ниже 3 %:
1. Разделите объем кислорода, ожидаемый от 5 мл 3 % раствора (4 9 мл, если шарик совершенно пустой или 52 мл, как в рассмотренном выше примере, учитывая несколько миллилитров воздуха, оставшихся в шарике) на объем кислорода, который вы действительно получили.
2. Умножьте предыдущее значение на объем раствора перекиси, который вы добавили бы к среде или субстрату, если бы это был 3 % раствор (это значение приводится в соответствующих разделах этой книги; например в разделе, посвященном агаровой культуре, вам будет нужно добавить 6 мл 3 % перекиси к 1 л стерилизованной агаровой среды).
Информация о точной концентрации перекиси наиболее важна, когда вы приготовляете агаровые чашки (см. ниже), так как вам придется работать с концентрациями, которые близки к нижнему порогу эффективности. При изготовлении посевного мицелия вы будете иметь дело с заметно более высокими концентрациями, так что возможностей для вариаций будет больше. Для приготовления основного субстрата я использую меньше перекиси, чем для посевного мицелия, но и в этом случае остается некоторая свобода для подбора концентраций. Я рекомендую производить тест с шариком для каждой новой бутылки с раствором перекиси, который используется для работы с агаром а также проверять перекись, который используется для посевного и основного субстрата, если только вы полностью не уверены в надежности поставщика. Поступая, таким образом, вы будете совершенно уверены, что культура защищена настолько, насколько это ожидается. Не исключено, что вам придется провести исследование местного рынка и выбрать продавца, который предоставляет наиболее надежный продукт. Звучит парадоксально, но может оказаться, что самый дешевый вариант является также и самым лучшим, потому что регулярный оборот продукции на складе поставщика будет там, где перекись дешевле. Если перекись отсутствует в ваших местных магазинах, то есть смысл поискать его на фирмах, занимающихся поставкой химреагентов. Они зачастую предлагают 30 % или 35 % раствор перекиси, который можно затем развести. Магазины, обслуживающие бассейны, также могут предлагать перекись в подобной концентрации. Имейте в виду, однако, что столь концентрированные растворы гораздо более опасны, чем стандартный 3 % раствор. Прочтите все предупреждающие надписи на этикетке бутыли и соответствующе обращайтесь с этим раствором.