Первой стадией выращивания грибов является размножение грибной ткани (мицелия) на агаре в чашках петри и последующий уход за ней. Полученные первичные культуры используются для хранения, размножения и поддержания грибных штаммов в здоровом состоянии путем последовательных пересевов, а также для инокуляции вторичных культур — посевного мицелия.
Подготовка чашек петри.
Существует немало рецептов агаровых сред, которые могут быть использованы для выращивания грибного мицелия на чашках петри. Я испробовал некоторые из них, но в настоящее время использую только один: мальт-дрожжевой агар (солод-дрожевой агар, malt yest agar), известный также как MYA. Этот агар подходит практически для любого вида грибов, которые я пробовал выращивать. Данная среда не настолько питательна, чтобы немедленно подвергнуться заражению, хотя многие штаммы распространяются по чашке петри на MYA за две или три недели. По моему мнению, при использовании перекисных сред нет особой необходимости в более быстром росте мицелия, потому что быстрое зарастание среды заставит вас производить пересевы на новые чашки для того, чтобы сохранить мицелий свежим. Кроме того, после нескольких последовательных переносов мицелия из чашки в чашку могут возникнуть проблемы со старением (сенесценцией) мицелия и поэтому некоторые грибоводы рекомендуют в таких случаях начинать все заново, используя сохраненную эталонную культуру. Согласно такому подходу, чем быстрее мицелий растет, тем раньше его придется поместить на хранение, поэтому я бы предпочел мицелий, который растет относительно медленно.
Я работаю с культурами в чашках петри, которые растут на среде, содержащую перекись. Заражения на перекисных чашках случаются редко и при соблюдении некоторых мер предосторожности вам не придется покупать ламинарный шкаф или строить главбокс для того, чтобы оградиться от контаминантов. Вы можете наполнять чашки на открытом воздухе на кухне. Хранить и заращивать чашки можно где угодно, лишь бы это место было относительно чистым, а условия внешней среды были бы подходящими для роста мицелия. Тем не менее, обратите внимание на рекомендации в конце этого раздела.
Мальт-дрожжевой агар, MYA
Вот рецепт, который я использую для приготовления 1 литра мальт-дрожжевого агара:
• 12 г агара
• 12 г тонко размолотого солода
• 1 г пищевых дрожжей
• 0.5 г муки (у меня идет такая ротация сортов: пшеница, рожь, кукуруза, рис, овес, просо)
• 0.5 г кроличьего корма (или другого гранулированного корма для животных)
• 4–5 г гранулированных опилок (количество гранул может быть увеличено для дереворазрушающих видов грибов, которые хуже растут на агаре)
• 1л воды из-под крана
Если вы приобретаете в магазине готовую смесь для приготовления мальт-дрожжевого агара, то она, скорее всего, уже будет содержать первые три ингредиента: агар, солод и дрожжи. Остальные ингредиенты вы можете добавить самостоятельно. Сверьте по инструкции производителя, сколько смеси рекомендуется добавлять к 1 л воды. Обычно требуется примерно 40 или 50 грамм. В зависимости от количественного соотношения агара и солода, можно сократить количество смеси вдвое от рекомендованного и получить среду, которая лучше подходит для длительного и здорового роста мицелия.
Я приготавливаю агаровую среду для чашек в такой последовательности:
1. Смешиваю все ингредиенты в банке с необходимым количеством воды. Банка должна быть в два раза больше по объему, чем объем полученной среды, чтобы агар не выплескивался при закипании во время приготовления.
2. Корректирую pH среды, добавляя небольшое количество питьевой соды (моя вода является кислотной, но если у вас вода щелочная, то можно добавить немного уксуса. Смотрите также замечания об измерении pH субстрата в главе, посвященной приготовлению основного субстрата).