Я провожу инокуляцию свежих чашек и пробирок, перенося в них с помощью скальпеля, простерилизованного в пламени спиртовки, небольшие кусочки обросшего мицелием агара, взятого из чашки, освоенной здоровой культурой. При использовании нагретого скальпеля для вырезания кусочков агара, я сперва охлаждаю скальпель, погружая его в агар на чашке, которая служит источником мицелия для переноса. Традиционный метод подразумевает охлаждение скальпеля путем погружения в агар на свежей, неиспользованной чашке. Нагретый скальпель может вызвать разложение перекиси в месте его погружения в агар. В нефильтрованном воздухе это место, будучи защищенным в меньшей степени, может стать исходной точкой для роста вредоносных микроорганизмов. Данное обстоятельство не является проблемой для чашки, из которой я произвожу перенос, потому что дальнейшее ее использование не предусмотрено. К свежей чашке указанная проблема относится в гораздо большей степени. Вот почему я охлаждаю скальпель в колонизированной чашке.
Если вы инокулируете чашку с использованием культуры, свободной от перекиси, не применяйте инокуляционную петлю, за исключением тех случаев, когда требуется выудить большой фрагмент мицелия. По моему опыту, незначительные фрагменты мицелия, извлеченные с помощью инокуляционной петли, не способны легко основать колонию в присутствии перекиси в концентрации, эффективной для борьбы с заражениями, особенно если используемая культура не была выращена в присутствии перекиси. Мицелий имеет гораздо лучшие шансы на приживание, если его сгусток взят из пробирки с дистиллированной водой или кусочек агара с мицелием извлечен из пробирки при помощи скальпеля или другого заостренного инструмента (признаюсь, что доставать кусочки агара из пробирки при помощи скальпеля, по меньшей мере, неудобно).
Культуры, которые предварительно не подвергались воздействию перекиси, зачастую «замирают» на некоторое время, в течение которого мицелий адаптируется к новым условиям среды. Иногда мицелий начинает расти по направлению от перекисного агара. Подобное поведение можно наблюдать, когда производится перенос мицелия из чашки, первоначально содержавшей перекись, который затем подвергся разложению после полного освоения всей поверхности агара мицелием и последующей избыточной инкубации в течение нескольких дней. Тем не менее, рано или поздно мицелий адаптируется к новым условиям и начнет нормальный рост по всей поверхности свежей среды.
У меня никогда не было проблем со штаммами, которые длительное время находились в присутствии перекиси. Обычно я осуществляю до десяти переносов мицелия на перекисесодержащую среду, после чего возвращаюсь к эталонным культурам, хранящимся без перекиси, хотя мой выбор этого числа переносов является произвольным, а возврат к эталонной культуре может быть совсем не обязательно.
Заметьте, что перекись защищает только ту поверхность агаровой чашки, которая не содержит растущего на ней мицелия. Мицелий, сам по себе, является незащищенным, потому что он разлагает перекись по мере своего роста. В этой связи, чашки с мицелием, который полностью освоил поверхность агара и далее продолжал свой рост в течение нескольких дней, с большей вероятностью содержат источники скрытого заражения.
Предотвращение скрытого заражения с помощью инокуляции нижней стороны агара.
При последовательных переносах мицелия в нефильтрованной атмосфере, в нем могут аккумулироваться контаминанты, даже если в агаре всегда присутствует перекись, а мицелий никогда не осваивает всей поверхности чашки. Вы можете никогда не увидеть заражения, растущего на грибном мицелии в чашках, но при этом невидимые микроорганизмы будут понемногу обустраиваться на месте. Такое «тайное заражение» может представлять проблему вне зависимости от того, используете вы перекись в посевном и основном субстрате, или нет. Естественно, что при использовании не защищенного перекисью посевного или плодоносящего субстрата скрытые заражения могут расцвести на незащищенной среде с большей вероятностью.