Я выращиваю мицелий в 800 г банках из-под соуса, потому что мне легче их достать. У этих банок крышки заворачиваются по резьбе. Литровые банки для консервирования тоже подойдут, особенно если у них есть резьбовые крышки, но крышки с внешним фиксатором тоже подойдут, если вы поместите внутрь их картонный диск несколько большего, чем надо, размера, чтобы обеспечить нужную высоту крышки для правильной фиксации.
Обязательно проверьте внутреннюю поверхность крышки на чистоту перед каждым использованием (это относится и к резьбе на банке). Следы старого субстрата на горле банки или внутри крышки могут вызвать большие проблемы. Пятна ржавчины на внутренней стороне крышек также могут удерживать частицы субстрата и обеспечивать условия для роста микробов.
Замечу, что добавление перекиси делает необязательным установку на крышках микропористых фильтров, как этого требуют традиционные методы. Тем не менее, крышки на банках являются уязвимым местом, даже при добавлении к среде перекиси, потому что вам придется перетряхивать банки для распределения мицелия, а при перетряхивании споры, которые диффундировали на внутреннюю поверхность крышки из воздуха (или фрагменты плесени, которые выросли в микроуглублениях на плохо отмытой крышке) могут войти в контакт с мицелием, который сам по себе не защищен. Чтобы исправить этот недостаток, присущий крышкам, я делаю следующее:
1. Приготовляю набор тонких картонных дисков, вырезанных по внутреннему размеру крышек (хорошо подходит картон от какой-нибудь коробки; просто очертите крышку на картоне при помощи ручки, а затем вырежьте по внутренней стороне круга, слегка к центру от линии).
2. В случае с субстратом-«десятиминуткой», я смешиваю ингредиенты, используя отдельную крышку, а затем, перед обработкой паром, устанавливаю крышки с картонными дисками на место.
3. После охлаждения субстрата я открываю крышки и смешиваю картонные диски 3 % раствором перекиси, наливая его в крышки слоем в 1–2 мм. Увлажненные перекисью крышки формируют затем барьер для источников заражения, находящихся в воздухе.
В случае с зерном или другим субстратом, требующим стерилизации, я заворачиваю крышки с картонными дисками в алюминиевую фольгу и стерилизую их отдельно от банок с субстратом, которые на время стерилизации закрыты отдельными крышками. Затем, после добавления перекиси в стерилизованный субстрат и распределения путем перетряхивания, я снимаю временные крышки и устанавливаю на место стерильные крышки с картонными дисками. После этого, я увлажняю диски 3 % раствором перекиси.
Стерильные контейнеры с субстратом могут быть инокулированы двумя способами. Вы можете вырезать кусочки мицелия из агаровой культуры с помощью стерильного скальпеля и бросить их в контейнеры (Если вы изберете этот метод, то сперва встряхните банку или пакет, чтобы субстрат пересыпался на одну сторону. Таким образом вы можете поместить кусочек мицелия вглубь субстрата, но он при этом окажется у стенки контейнера и за ним можно будет наблюдать). Или вы можете перетрясти контейнер после добавления мицелия. Я предпочитаю не перетряхивать контейнер — это часто заканчивается тем, что кусочки агара прилипают к стенке в месте над субстратом. Это место не защищено перекисью, а стряхнуть агар посредством дальнейшего встряхивания банки затруднительно. К тому же, перетряхивание субстрата с перекисью не дает очевидных преимуществ. Небольшие фрагменты мицелия, которые отделяются при перетряхивании, вероятно, слишком малы для того, чтобы эффективно адаптироваться и продолжить свой рост в присутствии перекиси, концентрация которого при использовании в посевном субстрате достаточно велика. Поэтому я бросаю кусочки агара (для медленно растущих штаммов — по три кусочка) вглубь субстрата и закрываю контейнер. В случае с опилочным субстратом для Н. erinaceus я дополнительно уплотняю субстрат, постукивая банкой о стол, чтобы субстрат охватил кусочки агара, потому что этот вид, похоже, предпочитает субстрат плотной, утрясенной консистенции.
Заметьте, что для инокуляции субстрата с перекисью следует использовать только адаптированный к перекиси мицелий, т. е. мицелий, выращенный на перекисесодержащем агаре. В противном случае, не адаптированный мицелий может погибнуть, или же для начала его роста потребуется слишком много времени, т. к. мицелий столкнется с перекисью в относительно высокой концентрации, которая обусловлена предлагаемой рецептурой для посевного субстрата. Вместе с тем, основной субстрат с перекисью содержит последнюю в гораздо меньшей концентрации и поэтому может быть безопасно инокулирован посевным мицелием, не адаптированным к перекиси.