Первоначально я помещал банки после инокуляции в свежие пластиковые пакеты, завязывая их на узел (я делал это немедленно после протирания банок спиртом). Я использовал пластиковые пакеты для того, чтобы обеспечить неподвижность окружающего банки воздуха и уберечь банки от приблудившихся грибных комариков (пакеты можно использовать повторно, если они не загрязнены). Позже я стал помещать банки на инкубацию без пакетов и это не оказало на конечный результат никакого отрицательного влияния.
В заключение я удостоверяюсь, что банки закрыты должным образом и оставляю их на несколько дней, пока мицелий не начнет осваивать окружающее пространство. Разлагающаяся перекись обеспечивает мицелий кислородом, поддерживая его рост на этом этапе, а уровень углекислого газа в это время еще не слишком высок. Когда ореол мицелия достигает сантиметра в поперечнике, я перетряхиваю субстрат. Через несколько дней в субстрате появляется множество новых точек роста (не затягивайте слишком с перетряхиванием субстрата, т. к. вместе с ростом ореола мицелия вокруг кусочка агара, количество перекиси, защищающего субстрат, постоянно уменьшается). Раньше я ослаблял крышку на банке после перетряхивания, чтобы обеспечить некоторый газообмен, но сейчас я считаю, что в этом нет необходимости. Картонный диск, очевидно, обеспечивает газообмен в достаточной степени, даже если крышка плотно закрыта.
Посевной мицелий готов к использованию, если он не очень плотно, но полностью освоил всю массу субстрата. Я обычно жду, когда мицелий начнет расти над поверхностью субстрата (на полсантиметра или более) и только после этого использую содержимое банки для инокуляции.
Если вы используете не банки, а пакеты с субстратом, порядок действий остается в основном тем же. Вам не нужно беспокоиться о попадании контаминантов в охлажденные пакеты, так как любые микроорганизмы, попавшие внутрь, будут уничтожены перекисью.
Что я думаю об использовании перекиси для приготовления жидких культур? Я не рассматривал такую возможность по двум причинам. Во-первых, любой метод инокуляции жидкой среды подразумевает перемешивание прививочного материала (или, в некоторых других способах, разламывание мицелия), что высвобождает в процессе инокуляции заметное количество перекисеразрушающих ферментов, попадающих в среду. Во-вторых, даже если предположить, что с первой проблемой можно справиться, я предвижу быстрое снижение концентрации перекиси в жидкой среде, потому что в ней будет циркулировать нетронутый грибной материал, содержащий внутри себя перекисеразрушающие ферменты. На твердых субстратах мицелий осваивает ограниченный участок, а концентрация перекиси на нетронутой среде остается на желаемом уровне. Уменьшение количества перекиси может быть восполнено ее регулярным добавлением, но это может потребовать методики измерения концентрации перекиси в очень разбавленных растворах.
Колонизация основных, плодоносящих субстратов — это третья стадия в процессе грибного культивирования, ведущая напрямую к производству съедобных грибов.
В связи с тем, что раствор перекиси так дешев, экономически выгодным является добавление достаточного количества перекисного раствора в плодоносящие субстраты, чтобы защитить их от заражений. С технической точки зрения это означает, что можно выращивать некоторые виды дереворазрушающих грибов без применения автоклавирования для стерилизации субстрата. С другой стороны, методики, о которых говорится в этом томе, предусматривают использование субстратов, не содержащих перекисеразрушающих ферментов. Перекись не даст заметных преимуществ (или не даст вовсе) на субстратах, которые все еще обладают значительной биологической активностью, таких, как компост, пастеризованная солома или свежие древесные опилки, обработанные в кипящей воде.
Первый материал, который я нашел идеальным для использования с перекисью, был гранулированным топливом для печей, работающих на прессованных опилках. Такой субстрат проходит предварительную термообработку и поэтому не вызывает разложения перекиси даже без автоклавирования. В этой связи, гранулированное топливо может быть легко пастеризовано при помощи кипящей воды для дальнейшего использования в качестве основного субстрата. Добавление воды одновременно обеспечивает необходимую влажность содержимого (когда вы добавляете кипящую воду к опилочным гранулам, они превращаются в опилки, из которых и были первоначально сделаны). Опилочные гранулы из древесины твердых пород являются, в общем случае, наилучшим выбором для большинства дереворазрушающих грибов, хотя гранулы, сделанные из еловых опилок тоже могут подойти (я подозреваю, что тепловая и механическая обработка, используемые при изготовлении гранулированного топлива, могут разрушать некоторые из смол, содержащихся в ели и являющихся ингибиторами роста мицелия). Проверьте, чтобы выбранные гранулированные опилки не содержали каких-либо добавок типа полимерного связующего (в большинстве случаев, добавок нет).