Рис. 18. Эффект перегрузки из-за большого объема и концентрации пробы.
Условия: прибор для КЭ — Beckman Р/АСЕ; капилляр — 75 мкм, 65/72 см; поле — 347 В/см; буфер А — 70 мМ борат, pH 8.5; буфер В — 40 мМ борат, pH 8.5; ввод пробы давлением, I или 5 с; проба фенилтриметидаммонийхлорид.
5.6. Наложение профилей потока
При разделении в КЭ всегда надо обращать внимание на то, чтобы не было разницы в уровнях между обоими сосудами с электролитом. Даже при незначительной разнице уровней в капилляре возникает течение, которое приводит к параболическому профилю потока. Этот эффект вызывает дополнительный вклад в уширение полос и сильно зависит от радиуса капилляра. В то время как в случае капилляра с внутренним диаметром 25 мкм этим эффектом можно практически пренебречь, в капилляре диаметром 100 мкм этот эффект сильно ухудшает эффективность разделения и оказывает влияние на разрешение пиков.
5.7. Резюме
Важнейшие причины уширения полос в КЭ представлены в таблице 5.
Таблица 5. Основные причины уширения полос
Причина уширения полос ∙ Примечание
Продольная диффузия ∙ Соответствует теоретическому пределу; увеличивается с уменьшением ММ и с увеличением времени анализа
Термические эффекты ∙ Приводят к конвекции и к локальным изменениям вязкости буфера
Длительность ввода пробы ∙ Должна быть меньше, чем зона, возникающая в результате диффузии; может увеличиваться для того, чтобы снизить порог обнаружения.
Адсорбция пробы на стенках ∙ Причина появления пиков с "хвостами" и плохой воспроизводимости времени миграции
Электродисперсия (различие в подвижностях) ∙ Причина треугольной формы пиков
Различие в уровнях жидкости ∙ Гидродинамический поток с соответствующим профилем потока
Аппаратура для КЭ появилась в продаже с 1988 года, количество предложений постоянно растет. Отдельные приборы принципиальных различий не имеют, так как сами системы разделения очень просты. Различия связаны с вводом пробы, а также числом и видом предлагаемых детекторов. Здесь не дается обзор рынка, а приводятся только типичные требования, предъявляемые к различным элементам аппаратуры.
Обзор рынка дается в журнале Nachr. Tech. Lab. (март 1993).
6.1. Источники напряжения
Напряжение должно регулироваться в области от -30 кВ до +30 кВ и при заданном значении по возможности оставаться постоянным. Максимально допустимый ток составляет 250 мкА, применение существенно больших значений на практике нецелесообразно. Кроме того, оказалось выгодным, если или напряжение, или ток могли бы поддерживаться постоянными независимо друг от друга. Автоматическая переполюсовка источника напряжения необходима только тогда, когда последовательность проб нужно обработать с помощью различных методов анализа и с применением по-разному ориентированного электрического поля.
Запись кривых напряжения и тока может указать на случайные нарушения во время анализа и быть полезной при поиске ошибок. В коммерческих приборах источник высокого напряжения автоматически отключается при открывании емкости, в которой происходит анализ, так что несчастные случаи исключаются. В приборах собственной конструкции, а также в коммерческих модульных приборах КЭ также обязательны меры предосторожности.
6.2. Капилляры
В КЭ обычно применяются кварцевые капилляры диаметром от 50 мкм до 100 мкм. В принципе возможно также применение стеклянных и пластиковых капилляров, которые, однако, не обладают достаточной проницаемостью в коротковолновой УФ-области,
Полиамидный слой кварцевого капилляра перед применением должен быть удален на месте детектирования механически или с помощью выжигания. С недавних пор в продаже появились также капилляры с покрытиями, проницаемыми для УФ-лучей. В большинстве случаев используются необработанные и немодифицированные капилляры. Кварцевые капилляры разных фирм различаются по точности непостоянству внутреннего диаметра, а также обработке внутренней поверхности и оптической проницаемости в области коротких волн. По этой причине для полного гидроксилирования поверхности новые капилляры перед их первым употреблением должны обрабатываться в течение 10 минут 1 М раствором NaOH и затем выдерживаться примерно 20 минут в разделительном буфере.
Наиболее дешевыми являются капилляры, которые предлагаются различными фирмами-производителями на метры. Цена их в настоящее время около 10 марок ФРГ за метр. Существенно дороже капилляры, которые продаются поштучно готовыми к употреблению. Цена здесь колеблется в зависимости от типа капилляра (с покрытием или без, с ячейкой детектора или без и т. д.) и находится в пределах от 100 до 400 марок ФРГ за капилляр.