***
Дмитрий Викторович задействовал свои старые знакомства среди профессуры научных институтов. Куча звонков, просьб, уговоров и, наконец, обещание выполнено. Через пару дней в больницу приехал сотрудник одного из институтов "в компании" с лабораторными мышами.– Валерий Игоревич, обещание выполнено с лихвой, – насколько возможно весело произнёс Дмитрий Викторович, – знакомься – Александр Фёдорович – лаборант, не понаслышке знакомый с получением моноклональных антител. Заткнет за пояс любого доктора.– Можно просто Александр, – протянул руку лаборант.Мужчины обменялись рукопожатием.– Всё необходимое для работы уже в лаборатории. – Добавил профессор.– Прекрасно, если вы не против, Александр, начнём немедленно. У нас на счету каждый час, – с нетерпением протараторил Валера.– Да, конечно. Мне только...– Сколько нам в общей сложности потребуется времени? – прервал его Валера.– Не менее трех недель.– Долго.– Другого варианта у вас нет, как мне пояснил Дмитрий Викторович.– Нет.– Тогда пойдём по предложенному вами пути. Мне бы только выпить кофе...– Кофе позже. – Отрезал Валера.– Ну что ж, – лаборант переглянулся с профессором, и сдался, видя нетерпение Валеры, – пойдёмте в лабораторию.– Я начал бы иммунизацию мышей, но у меня не было адъюванта, – объяснил по пути Валера.– Я привёз все необходимое, не беспокойтесь.Мужчины вошли в лабораторию и накинули одноразовые халаты, висевшие у входа.– Я так понимаю, вы теоретически подкованы, – констатировал Александр, расставляя на столе реактивы и инструменты из медицинского чемодана, ждавшего их в лаборатории.– Да, изучил тему в Интернете, насколько было возможно.– Всё же обрисую вам план действий. – Он достал из папки сложенный в несколько раз картонный лист. Развернул его и положил на стол. – Первый этап, – он ткнул пальцем в нарисованную мышь, – иммунизация животных. Мы будем вводить антигены прионов, пока у мышей в крови не появится высокий уровень антител к инфекции. Второй этап, – он провел пальцем по стрелке, ведущей к изображению селезенки, – мы удалим у мышей селезенки для получения взвеси B-лимфоцитов, которые вырабатывают антитела.Затем, клетки селезенки смешаем с клетками миеломы, которые способны непрерывно расти в культуре. – Продолжал Александр, по-прежнему сопровождая рассказ указанием на схеме. – Клетки селезенки и клетки миеломы сольются, образуя гибридные клетки. Эти гибридные клетки поместим в селективную среду, которая позволит расти только им. Неслившиеся миеломные клетки и В-лимфоциты при этом погибнут. Гибридные клетки разрастутся, образуя клон гибридом.Последним этапом, гибридомы проверим в серологической лаборатории на продукцию нужных антител. Выбранные гибридомы затем культивируем для получения больших количеств моноклональных антител.Есть два способа наработки антител - культуральный и в организме мышей. Наработка антител в культуральных средах – это длительно и трудоемко, поэтому мы будем использовать мышей. Внутрибрюшинно введём им гибридомы. А через две недели из брюшной полости мышей заберём асцит, содержащий моноклональные антитела.После пятнадцатиминутной подготовки и инструктажа Валера с Александром начали иммунизацию лабораторных мышей прионной инфекцией. Для этой цели были отобраны десять здоровых животных. Валера ввёл в заднюю лапу каждой мыши антиген с адъювантом.В последующие дни они проводили иммунизации, вводя антиген внутрибрюшинно. Александр ежедневно забирал кровь из хвостовой вены мышей и направлял в серологическую лабораторию для контроля уровня вырабатываемых антител. Когда уровень антител достиг нужных значений, они выбрали трех животных с самым высоким титром. Это были мыши с гладкой белой шерстью и бусинками красных глаз. Валера кормил животных сам специализированных кормом, а иногда приносил кусочки сыра Маасдам, припасенного от завтрака.Судьба этих мышей была предрешена и незавидна. В своей маленькой жизни они должны были сделать великое дело, порой непосильное для самого стойкого человека. Трагическая, но, в то же время героическая судьба животных трогала Валеру. Но иначе получить нужный препарат было невозможно.– Вы постарались больше всех, – вкрадчиво сказал он, открывая клетку, – получайте бонус, – он протянул кусочки сыра каждой из мышей. Те незамедлительно хватали лакомство и, крепко вцепившись коготками, принимались есть.– Александр сказал, что ты здесь "сюсюкаешься" с мышами. – Внезапно раздался за спиной голос Дмитрия Викторовича.– "Сюсюкаюсь"? Это выражение Александра? – вопросом не оборачиваясь ответил Валера, разглядывая трапезничающих животных.– Нет, моё. Но оно выражает суть. Ты слишком к ним привязался.– Знаешь, Дмитрий Викторович, по приезду в этот город начинаю узнавать о себе много нового. Видимо таков я есть: очень привязываюсь к тем, с кем нахожусь рядом. И с кем делаю общее дело.– До сих пор дуешься, что я не сказал правду сразу?– Я же не дамочка, чтобы "дуться", – Валера обернулся к профессору.– Я объяснил, почему поступил подобным образом, и оправдываться больше не собираюсь. – Отрезал тот. – Я сам займусь умерщвлением мышей, а Александр удалит селезенку и вымоет из неё спленоциты.Валера отрицательно покачал головой.– Так будет лучше для тебя, – настаивал профессор.– Я должен сделать это сам.– Мышам ты ничего не должен. Ты должен Иветте. Человеку.– Хочешь сказать, я забыл об этом?!– Хватит споров, нам обоим нелегко.– Только мне нелегко «в десятой степени»!– Пойди, прими душ и отдохни пару часов. Тебе нужно успокоиться.Валера смолчал и, мельком взглянув на клетку с тремя "лучшими" мышами, резко направился к выходу из вивария.Когда Валера вернулся в лабораторию, дело было сделано. Растворы со спленоцитами из удалённых селезенок мышей стояли в ламинарном боксе.Ординатор надел противочумный костюм и уселся на стул, стоящий у бокса. Взял камеру Горяева. Для того, чтобы толстое стекло, называемое камерой смогло вместить жидкость, предстояло притереть к нему тонкое стеклышко. Валера сделал это аккуратно, но уверенно. Затем приподнял камеру и, слегка повертев её в руке, заметил радужные полосы на притертом стеклышке. Отлично. Он все делает правильно. Стекло не отвалится при использовании камеры. Валера стеклянной палочкой взял жидкость из первой пробирки, заправил ею камеру и под микроскопом посчитал количество спленоцитов, полученных из селезенки мыши. Тоже самое проделал с двумя другими пробирками. Когда работа была завершена, он позвонил Александру.– Пора начинать гибридизацию.– Понял, иду.Александр нажал кнопку отбой и через десять минут вошёл в лабораторию в противочумном костюме. – Что ж, начинаем смешивать клетки селезенки с миеломными. Соединяй их в соотношении один к одному, а потом я добавлю пятидесятипроцентный раствор полиэтиленгликоля.Валера выполнял все действия под чутким руководством Александра.– Отлично, – произнёс лаборант, когда работа была выполнена. – Клетки селезенки и клетки миеломы сольются, образуя гибридные. Эти гибридные клетки будут способны непрерывно расти и вырабатывать антитела. Таким образом, они образуют клон гибридом.