Время культивации при температуре 45 °C в аэробных условиях составляет сутки. О росте микробов свидетельствует помутнение коричневой среды. В таком виде термо-толерантные микроорганизмы можно сохранять при комнатной температуре длительный период и в любое время использовать для внесения в субстрат.
Положительное влияние защитных микроорганизмов состоит в том, что они вырабатывают антибиотическое вещество, ингибирующее развитие конкурентов вешенки обыкновенной; быстро усваивают углеводы субстрата (сахарозу, крахмал и др.), лишая конкурентов питания.
При искусственном введении защитных микроорганизмов в субстрат следует учитывать, что количество углеводов в нем зависит от вида растительных остатков, степени их зрелости, места произрастания и места хранения.
Оптимальное значение pH среды для развития защитных микроорганизмов составляет 6,0–6,5, но они неплохо развиваются и при pH 5,4–7 (приблизительно в этих пределах находятся значения pH всех растительных остатков, используемых для выращивания вешенки обыкновенной). Если субстрат имеет кислую реакцию, то с помощью гашеной извести pH доводят до необходимой величины. Защитные микроорганизмы не изменяют pH субстрата.
Подготовка субстрата к инокуляции мицелием.Подготавливать субстрат к инокуляции мицелием необходимо в специальном или приспособленном для этого помещении, сохраняющем тепло и устойчивом к повышению влажности. Сначала субстрат увлажняют, для чего его выкладывают на полиэтиленовую пленку и заливают водой так, чтобы она могла свободно впитываться в субстрат. Обычно 1 центнер перемолотых стержней початков кукурузы впитывает 100–120 л воды. Чтобы весь субстрат в одинаковой мере пропитался водой, его следует перемешивать. Невпитавшаяся вода стекает. Одновременно с увлажнением субстрата производится инокуляция его защитными микроорганизмами. На 1 центнер сухого субстрата в среднем требуется 4–5 л суспензии защитных микроорганизмов. Для равномерного распределения защитных микроорганизмов по субстрату их следует смешать с порцией воды, необходимой для увлажнения 2 центнеров сухого субстрата. Если субстрат имеет кислую реакцию (pH ниже 5,4), то в воду надо добавить гашеную известь (из расчета 0,5–0,7 кг на 100–120 л).
После того как субстрат впитает воду с суспензией микроорганизмов, его хорошо перемешивают и укладывают в ящики, покрытые полиэтиленовой пленкой с перфорацией (диаметр отверстий 1–2 мм, расстояние между ними 10 см), или в полиэтиленовые мешки. При размере ящиков или мешков 40x60x20 см создаются условия для хорошей аэрации и поддержания оптимальной температуры для роста мицелия. Затем в закрытое помещение пускают пар. Ящики или мешки должны быть уложены так, чтобы для пара была доступной максимальная площадь их поверхности. Нагретый до температуры 55 °C субстрат выдерживают в течение 12 часов. После этого его постепенно охлаждают в этом же помещении, а затем переносят в другое. Измельченный субстрат подается пневматическим устройством в загрузочный контейнер. Затем с помощью специального подающего устройства субстрат поступает в миксер, где смешивается с водой и некоторыми фунгицидами. Для уничтожения конкурирующих микроорганизмов и плесеней субстрат в отсеках нагревают, а затем охлаждают до температуры 20–25 °C. В бункере, снабженном дозатором мицелия, определенное количество субстрата смешивается с соответствующей порцией мицелия. На упаковочной линии инокулированный мицелием субстрат упаковывается в мешки, ящики или специальные контейнеры.
Инокуляция мицелием.После того как температура внутри и на поверхности субстрата достигнет 26–30 °C, можно приступить к инокуляции субстрата мицелием. Мицелий вносят стерильными деревянными палочками равномерно по всей поверхности субстрата на глубину 8—12 см. Масса мицелия должна составлять V 20—V 50массы субстрата. Следует учитывать, что чем больше вносится мицелия, тем быстрее происходит пронизывание субстрата гифами. При выращивании вешенки обыкновенной без добавления защитных микроорганизмов или в летнее время, когда создаются более благоприятные условия для распространения инфекции (особенно насекомыми), для ускорения процесса пронизывания субстрата гифами следует вносить 1/ 20часть мицелия по отношению к массе субстрата.