Для диагностики КЭ используется метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот с ПЦР – геномная РНК ВКЭ определяется с применением молекулярных зондов – меченых фрагментов нуклеиновой кислоты, комплементарных к определенным участкам генома ВКЭ. Преимущества анализа РНК ВКЭ перед методом биопробы и анализом антигенов вируса иммуноферментным методом или методом флюоресцирующих антител очевидны.
Метод молекулярной гибридизации – более высокочувствительный тест: вирусная РНК выявлена из 50,9% исследованных проб крови больных с острым течением КЭ. При исследовании тех же образцов крови методом биопробы на беспородных белых мышах инфекционный вирус выявлен в 23,4% случаев. Столь значительное расхождение в результатах анализов в сыворотке объясняется возможной маскировкой вируса за счет формирования иммунных комплексов. В процессе депротеинизации при выделении РНК из анализируемого образца нуклеопротеиновые комплексы диссоциируют, и освобождающаяся вирусная РНК увеличивает частоту положительных результатов гибридизационного анализа. Более частое выявление РНК ВКЭ в крови больных может быть обусловлено также значительно более активным, чем репликация инфекционных вирионов, синтезом вирусной РНК в инфицированной клетке.
Рис. 3. Алгоритм диагностики клещевого энцефалита.
Для диагностики КЭ используется наиболее чувствительный вариант ПЦР–анализа – метод обратной транскрипции с последующей «nested» полимеразной цепной реакцией (ОТ–ПЦР).
Чувствительность анализа – 100–200 геномов ВКЭ на исследуемую пробу. Сверхчувствительный ПЦР–анализ РНК позволяет надежно с высокой специфичностью выявлять ВКЭ в исследуемых образцах, содержащих вирус в десятки–сотни тысяч раз в меньших количествах, чем это позволяет выявлять ИФА–анализ антигена ВКЭ.
Для проведения лабораторного ПЦР–анализа РНК ЗАО «Вектор–Бест» выпускает дополнительный набор реагентов, специально предназначенный для выделения РНК из биологических образцов (крови, сывороток крови, форменных элементов крови, мочи, слюны, ликвора, соскобов со слизистой, культур клеток).
В последнее время ПЦР–анализ РНК ВКЭ, метод ИФА для индикации вирусного антигена в клещах, снятых с людей, все чаще применяются для прогноза риска заболевания КЭ. При положительных результатах тестирования рекомендуется экстренная серопрофилактика укушенного путем внутримышечного введения специфического противоклещевого иммуноглобулина.
Дифференциальная диагностика должна учитывать возможность заболевания пациента японским энцефалитом, геморрагической лихорадкой с почечным синдромом, энтеровирусным менингитом, клещевым риккетсиозом, болезнью Лайма и др.
Лечение и специфическая профилактика клещевого энцефалита
Лечение КЭ.
Клиническое течение КЭ далеко не стереотипно. Первые 2–4 дня заболевания еще не определяют ее клиническую форму и тяжесть. Ведущим в это время часто является лишь общеинфекционный синдром, а неврологические проявления могут быть позже. Следовательно, каждого больного в этом периоде следует воспринимать как потенциально тяжелого и лечить соответственно. Учитывая избирательный тропизм ВКЭ к моторным структурам ЦНС, необходимо в остром (лихорадочном) периоде болезни предельно ограничить двигательную активность больного строгим постельным режимом и транспортировкой на носилках (при необходимости).
Лечение больных КЭ проводят по общим принципам, независимо от проводимых ранее профилактических прививок или применения с профилактической целью специфического γ–глобулина. В остром периоде болезни, даже при легких формах, больным следует назначать постельный режим до исчезновения симптомов интоксикации. Почти полное ограничение движения, щадящее транспортирование, сведение к минимуму болевых раздражений отчетливо улучшают прогноз заболевания. Не менее важную роль в лечении имеет рациональное питание больных. Диета назначается с учетом функциональных нарушений желудка, кишечника, печени. Принимая во внимание наблюдаемые у ряда больных нарушения витаминного баланса, необходимо назначение витаминов группы В и С. Аскорбиновая кислота, стимулирующая функцию надпочечников, а также улучшающая антитоксическую и пигментную функции печени, должна вводиться в количестве от 300 до 1000 мг/сут.
Растущая заболеваемость и реальность развития тяжелой острой или хронической инфекции КЭ не оставляют сомнения в актуальности поиска новых средств и процедур лечения. С целью выздоровления пациента или ремиссии болезни разработан стандарт (протокол) лечения КЭ, где решающая роль придается этиотропным средствам: иммуноглобулинам человека против КЭ, противоэнцефалитной иммунной плазме, интерферону (реаферону) и рибонуклеазе. Применение этих основных средств наравне с другими патогенетическими лекарственными препаратами дозируется в зависимости от формы проявления инфекции.