Для диагностики потивирусной инфекции ванили на общем или специфическом уровне доступно несколько молекулярных методов. Универсальные моноклональные антитела к потивирусу (Jordan and Hammond, 1991), коммерциализированные Agdia (США), доказали свою эффективность в обнаружении всех видов потивируса, идентифицированных у ванили с помощью Indirect Simple Sandwich ELISA. Аналогичным образом, несколько мотивов, консервативных в геноме потивирусов, были использованы для создания ряда вырожденных праймеров для амплификации с помощью ОТ-ПЦР соответствующей последовательности в геноме потивирусов (Chen et al., 2001; Colinet et al., 1998; Gibbs and Mackenzie, 1997; Ha et al., 2008; Langeveld et al., 1991; Marie-Jeanne et al., 2000; Pappu et al., 1993). Оба метода могут использоваться для оценки потивирусного статуса материала, но не позволяют конкретно идентифицировать обнаруженные виды потивируса.
Для потивирусов специфическая идентификация с помощью серологии ненадежна из-за многочисленных перекрестных реакций между видами вирусов (Shukla et al., 1994). Чтобы преодолеть эту проблему, можно использовать простой однопробирный одностадийный анализ ОТ-ПЦР с использованием вырожденных праймеров с последующим прямым секвенированием короткого фрагмента (Grisoni et al., 2006). Поскольку технологии ОТ-ПЦР и секвенирования становятся все более простыми и дешевыми, этот метод можно использовать в эпидемиологических исследованиях, требующих высокой производительности. Технологии микрочипов, которые являются многообещающим способом получения широкого спектра, специфического и чувствительного инструмента обнаружения потивирусов, находятся в стадии разработки (Boonham et al., 2007; Wei et al., 2009).
Эпидемиология
Потивирусы несут ответственность за большие потери многих экономически важных культур, поскольку легко распространяются по полям. Некоторые из них передаются через семена, большинство – механически (хотя и неэффективно), но все они эффективно хотя и непостоянно передаются тлей (Brunt, 1992).
VanMV легко передавался от V. tahitensis к V. pompona персиковой тлёй Myzus persicae (Wisler et al., 1987). Экспериментальные тесты передачи WMV-Tonga от инфицированной Nicotiana clevelandii к здоровой с использованием Aphis gossypii были успешными, но тесты передачи с участием V. planifolia в качестве растения-донора с той же тлей не увенчались успехом (Pearson and Pone, 1988; Pearson et al., 1990; Wang и Пирсон, 1992; Ван и др., 1993, 1997). Однако, несколько полевых данных о потивирусных инфекциях подтверждают роль тли в распространении потивирусов на участках ванили (Richard et al., 2009). Успешные испытания передачи тлёй соответствовали непостоянному способу передачи. При непостоянной передаче нескольких секунд или минут достаточно для приобретения вируса или инокуляции питающих проб переносчиком. Поэтому неудивительно наблюдать тяжелую потивирусную инфекцию в отсутствие на ванили колоний установленной тли (за исключением Cerataphis orchidarum, для которой описаны только бескрылые формы и которая не считается эффективным переносчиком вируса).
Несколько потивирусов передаются с семенами, в частности CABMV у нескольких видов бобовых (Gillaspie, 2001), BCMV у некоторых сортов Phaseolus и Vigna и BYMV у нескольких видов стручковых (Aftab and Freeman, 2006). Кроме того, BCMV передается через пыльцу (Card et al., 2007). DsMV, WMMV и WVMV, как известно, не передаются с семенами, но было высказано предположение, что такая передача может быть более распространена, чем признано в настоящее время, особенно в подгруппе BCMV (Gibbs et al., 2008a).
Передача вирусов с семенами имеет эпидемиологические последствия при наличии дополнительных культур и сорняков. В полевых условиях первичный инокулят потивируса может поступать из инфицированных черенков ванили, окружающих растений, многолетних или однолетних сорняков, в семенах которых вирус может перезимовать. Из этого первичного инокулята потивирус распространяется по участку тлями. Молекулярное сходство между изолятами, поражающими ваниль и сорняки, способствует передаче вирусов от одного вида к другому. Например, на Мадагаскаре изоляты BCMV были идентифицированы в ванили и прилегающем сорняке Senna sp. (Leguminosae), которые были на 100% идентичны по последовательностям генов CP (Grisoni et al., 2006). На острове Реюньон быстрая вспышка CABMV на недавно посаженном участке ванили с использованием безвирусных черенков взаимосвязана с межрядной Vigna unguiculata, у которой CABMV передается с семенами. Напротив, использование Gliricidia sepium, бобового дерева, часто используемого в качестве опор для участков ванили и которое из-за частой обрезки сильно заражено тлей Aphis craccivora (эффективный переносчик вирусов подгруппы BCMV), похоже, не увеличивает количество новых случаев потивируса на участках ванили, по сравнению с использованием поддерживающих деревьев без тлей, таких как Leucena glauca (Grisoni et al., 2004). Однако, при наличии других источников вируса высокие популяции тли могут стать проблемой.